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摘要：目的補骨脂中補骨脂素和異補骨脂素含量測定的研究。方法采用高效液相色譜（HPLC）法測定，色譜柱為IntetsilODS―3柱，用甲醇-水（48∶52）為流動相，檢測波長245 m。結果平均回收率分別為98.5%,RSD為2.8%；98.8%，RSD為2.5%（n =5）。結論方法簡單、快捷、精確，可作為補骨脂質量檢測方法之一。
關鍵詞：高效液相色譜； 補骨脂； 補骨脂素和異補骨脂素
補骨脂為豆科植物補骨脂（Posralea corylifolia L.）的果實，具溫腎助陽，納氣，止瀉之功效。收載于《中國藥典》2000年版1部，列于《開寶本草》，一名破故紙，謂：“補骨脂生嶺南諸州及波斯國。”……李時珍謂［1］：“補骨脂言其功也，胡人呼為婆固脂，而俗訛為破故紙也。”
1 儀器和試藥
儀器：Agilent 1100（四元泵）高效液相色譜儀；UV3210紫外分光光度計；試藥：甲醇（色譜純），水為純化水，其他試劑均為分析純。補骨脂素和異補骨脂素對照品，供含量測定用，由中檢所提供。樣品：補骨脂藥材購于廣東清平中藥材市場。
2 方法和結果
2.1 紫外吸收波長的研究分別取補骨脂素和異補骨脂素對照品溶液在200~400 nm波長范圍內作光譜掃描，結果補骨脂素和異補骨脂素在245 nm處均有最大吸收，故本含量測定項選擇245 nm作為檢測波長。
2.2 色譜條件色譜柱：IntesilODS-3柱（5 μm,4.6 mm×250 mm），流動相：甲醇水（48：52）；流速：0.8 ml/min。檢測波長：245 nm；柱溫：25℃。補骨脂素和異補骨脂素的tR分別為15.9，18.2 min。
2.3 線性關系考察精密稱取補骨脂素和異補骨脂素對照品各12.5 mg，置25 ml量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，精確吸取上述對照品溶液1，2，3，4，5 ml分別置于25 ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。精密吸取上述對照品溶液10 μ１進樣測定。以對照品進樣量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，線性回歸方程分別為：補骨脂素Y=382 4X+0.8,r=0.999 7；異補骨脂素Y=429 2X－4.533 4，r=0.999 9；結果表明：補骨脂素和異補骨脂素在進樣量0.2~1 μg范圍內時呈良好的線性關系。
2.4 對照品溶液和供試品溶液的制備
2.4.1 對照品溶液的制備精密稱取補骨脂素和異補骨脂素對照品適量，加甲醇制成每毫升各含50 μg的混合溶液，即得。
2.4.2 供試品溶液的制備取本品1 g研細，精密稱定，置索氏提取器中，加氯仿適量，加熱提取4 h，放冷，提取液回收至干，殘渣加甲醇使溶解，置于10 ml量瓶中，甲醇少量洗滌容器，洗液并入量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
2.5 精密度實驗精密吸取供試品溶液10 μl，注入液相色譜儀，連續測定6次，計算補骨脂素和異補骨脂素含量。結果表明6次測定結果的平均值分別為1.47，1.72 mg/g，RSD分別為2.5%和2.8%。
2.6 穩定性實驗精密吸取供試品溶液10 μl，每間隔1 h測定1次，共測定5次，再過24 h測定1次，結果表明供試品溶液在24 h內穩定。
2.7 重復性實驗對同一批樣品6份，依法測定，平均含量分別為1.55 mg/g，RSD 2.4%；1.83 mg/g，RSD 2.6%，結果表明本法的重復性較好。
2.8 回收率實驗精密稱取已知含量補骨脂藥材約1 g ，精密添加補骨脂素和異補骨脂素對照品適量，按供試品溶液制備方法制備，依法測定，計算回收率，結果平均回收率分別為97.5%，RSD為2.8%；98.8%，RSD為2.5%（n=5）。
2.9 樣品測定精密吸取供試品溶液10 μl，注入高效液相色譜儀，測定補骨脂素和異補骨脂素含量，結果5批平均含量補骨脂素1.32 mg/g，異補骨脂素1.65 mg/g。
3 討論
補骨脂素和異補骨脂素為香豆素類成分的異構體，在《中國藥典》2000年版補骨脂鑒別薄層色譜條件下已能將二者分離，本實驗采用高效液相色譜法測定補骨脂中補骨脂素和異補骨脂素的含量具有方法簡單、快捷、精確的優點。
參考文獻：
［1］ 徐國鈞.中國藥材學［M］.北京:中國醫藥科技出版社,1996:1066.
［2］ 陸蓓,吳韶銘.HPLC法測定益腎靈顆粒中補骨脂素和異補骨脂素的含量［J］.中國藥品標準,2002，(4):23.
［3］ 國家藥典委員會.中國藥典，Ⅰ部［S］.北京:化學工業出版社,2000.
(廣東省清遠市藥品檢驗所 511500； 廣東省藥品檢驗所，廣東 廣州 510180；海南省邊防總隊醫院藥局 570208)
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