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廣西不同產地莪術中吉馬酮的含量比較

時間:2012-3-1 17:43:54作者:admin
【摘要】 目的建立以高效液相色譜法測定桂莪術中吉馬酮含量的方法,并檢測廣西不同產地桂莪術中吉馬酮的含量。方法采用Shim-pack CLC-ODS柱(6.0 mmID×15 cm, 5 μm),流動相為乙腈-水(60∶40),流速:l ml/min,檢測波長215 nm。結果吉馬酮在5.825~582.5 μg/ml范圍內樣品濃度與峰面積呈良好的線性關系(r=0.999 92),平均回收率為101.41%,RSD=2.82%(n=6)。結論福綿、港江、興業3個產地吉馬酮含量最高;不同產地桂莪術中吉馬酮的含量存在較大差異。

  【關鍵詞】 莪術 吉馬酮 高效液相色譜法

  中藥莪術是姜科植物蓬莪術Curcuma phaeocaulis Valeton,廣西莪術Curcuma kw angsiensis S. G. Lee C. F. Liang和溫郁金Curcuma wenyujin Y. H. Chen et C. Ling的根狀莖,具抗腫瘤、抗菌、行氣破血、消積止痛等功效,主治積滯脹痛、血腹痛、肝脾腫大、血滯經閉、早期宮頸癌[1]。首載于《雷公炮炙論》。主要產于四川、福建、浙江、廣西等地。其中廣西莪術Curcuma kw angsiensis S. G. Lee C. F. Liang又名桂莪術,主要分布于廣西桂中南地區。莪術中含揮發油、姜黃素等成分,揮發油為其抗腫瘤有效成分,姜黃素為其降血脂、抗氧化、抗炎的主要有效成分。研究中發現,莪術油中的吉馬酮含量較高,且對癌細胞具有一定的抑制作用[2]。為了能更好地控制廣西莪術的質量,現用HPLC法對廣西境內不同產地的廣西莪術進行含量測定,研究比較其含量差異。

  1  儀器與試藥

  美國Agilent1100Series型高效液相色譜儀:四元泵,在線脫氣機,自動進樣器(G1313A),柱溫箱,可變波長檢測器。Simplicity185型超純水系統(MILLIPORE)。KQ-200VDB型雙頻數控超聲波清洗器(昆山超聲儀器有限公司)。LG-16W型離心機(北京醫用離心機廠)。甲醇、乙腈為色譜純,其余試劑均為分析純,水為高純水。吉馬酮對照品(中國藥品生物制品檢定所,供含量測定用,批號111665-200401)。藥材采自各個產地,經本校藥用植物教研室王建老師鑒定為姜科植物廣西莪術Curcuma kw angsiensis S. G. Lee C. F. Liang。

  2  方法與結果

  2.1  色譜條件日本島津公司Shim-pack CLC-ODS柱(6.0 mmID×15 cm,5 μm);流動相為乙腈-水(60∶40),流速:1 ml/min,柱溫:35℃,檢測波長215 nm。進樣量5 μl。理論塔板數以吉馬酮峰計應不低于6 000。在此色譜條件下,吉馬酮對照品和桂莪術樣品的HPLC色譜圖分別見圖1~2。

  2.2  對照品溶液的配制精密稱取吉馬酮對照品11.65 mg,置10 ml量瓶中,加60%乙腈溶解并定容至刻度,即得吉馬酮對照品儲備液。 分別精密量取5 ,25,50,250,500 μl對照品儲備液,置1 ml量瓶中,用60%乙腈定容至刻度,即得不同濃度的吉馬酮對照品溶液。

  2.3  供試樣品溶液的制備取切碎的廣西莪術鮮根莖5 g,精密稱定,精密加入甲醇25 ml,稱定重量,回流提取1 h,放冷至室溫,用甲醇補足減失的重量,搖勻,0.45 μm濾膜濾過,即得。

  2.4  線性關系的考察將“2.2”項下5個濃度的對照品溶液注入高效液相色譜儀,進樣量5 μl,按上述色譜條件測定峰面積。以峰面積A對樣品濃度C(μg/ml)進行回歸,得標準曲線:A =15.93C-20.92,r=0.999 92,其線性范圍為5.825~582.5 μg/ml。

  圖1  吉馬酮對照品HPLC色譜圖(略)

  圖2  桂莪術樣品(桂平金田)HPLC色譜圖(略)

  2.5  精密度實驗取對照品溶液,連續進樣6次,進樣5 μl/次,對峰面積進行考察,峰面積的RSD為0.12%,說明儀器精密度很好。

  2.6  穩定性實驗取同一份供試品溶液,分別于0,2,4,6,8,12,24 h不同時間間隔點進樣分析,對峰面積進行考察,峰面積的RSD為1.17%,結果表明樣品溶液在24 h穩定。

  2.7  重復性實驗取同一莪術樣品6份,切碎,混勻,精密稱定,分別按“2.3”項下供試品溶液的制備方法制備供試品溶液,在上述色譜條件下分別測定其色譜圖,并計算其吉馬酮的含量,結果吉馬酮的平均含量為4.23%,RSD為1.7%(n=6),表明該法重復性較好。

  2.8  加樣回收率實驗精密稱取吉馬酮對照品10.9 mg,置50 ml容量瓶中,加甲醇溶解并稀釋至刻度。精密稱取已知吉馬酮含量的切碎的廣西莪術鮮根莖6份各2.5 g,各分別精密加入甲醇20 ml及上述對照品溶液5 ml,其余操作同“2.3”項中的方法,結果表明吉馬酮平均回收率為101.41%,RSD=2.82%(n=6),說明本方法準確度較好。數據見表1。

  表1  加樣回收率實驗(略)

  2.9  樣品測定取不同產地的莪術鮮根莖樣品,按“2.3”項下方法制備各供試品溶液。取供試液5 μl,注入高效液相色譜儀,按所設定的HPLC條件進行測定,按標準曲線法計算各樣品中吉馬酮的含量,每個產地取3份樣品求平均值。結果見表2。

  表2  不同產地吉馬酮含量測定結果比較(略)

  3  討論

  廣西自古以來就是桂莪術的道地產地,自20世紀60年代野生變家種以來,栽培歷史較久,栽培經驗豐富。在國家大力推廣“三農”政策的今天,發展當地優勢產業,開辟大量的桂莪術種植基地,成了農民發家致富的一條捷徑。欽州市桂莪術種植面積約2 300 ha,占全廣西莪術種植面積的50%以上,其中主要分布在欽北區、靈山陸屋和青塘鎮。靈山陸屋鎮已自發形成莪術集散地,每年收獲季節有大量全國各地客商前來聯系業務。有3 325戶種植農戶,種植面積達483.5 ha。在玉林、興業、南寧、貴港也有廣泛種植。

  本實驗考察了不同提取溶劑及不同提取方法、提取時間、溶劑量等影響因素對提取率的影響,確定了本實驗所采用的5倍量甲醇為溶劑,回流提取30 min的最佳提取方法。

  從實驗數據上看,不同產地的桂莪術中吉馬酮的含量有明顯差異。其中福綿、港江、興業三個產地吉馬酮含量最高,金田、陸屋和成均吉馬酮含量較高,三隆含量最低。由此得知,玉林市內種植的桂莪術吉馬酮含量普遍高,建議應當大力推廣種植,增加種植面積。欽州市種植面積最大,但吉馬酮含量較玉林市低。

  本實驗建立了RP-HPLC法直接測定桂莪術中吉馬酮含量的方法,通過方法學考察表明,該定量檢測方法結果可靠,為桂莪術中吉馬酮的分析研究提供了可信的檢測手段。

  【參考文獻】
  [1] 國家藥典委員會. 中國藥典,Ⅰ部[S].北京:人民衛生出版社,2005:194.

  [2] 王 炎,王慕鄒. 莪術的質量研究[J].藥學學報,2001,36(11):849

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